ELISA試劑盒：自然殺傷細(xì)胞或 NK 細(xì)胞是一組*的淋巴細(xì)胞，具有先天的細(xì)胞毒性和免疫調(diào)節(jié)能力。這些大顆粒淋巴細(xì)胞占人體循環(huán)淋巴細(xì)胞的 5-20%，也存在于各種外周組織中。NK 細(xì)胞通過(guò)自主靶向外來(lái)、感染或癌細(xì)胞并釋放直接觸發(fā)細(xì)胞裂解的細(xì)胞毒性顆粒來(lái)直接促進(jìn)免疫。NK 細(xì)胞還通過(guò)產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子（如干擾素γ（IFNG）和腫瘤壞死因子α（TNF））間接影響免疫反應(yīng)。NK 細(xì)胞在免疫中發(fā)揮著核心和多樣化的作用，這證明了對(duì)這種細(xì)胞類型在許多研究領(lǐng)域的極大興趣，包括癌癥生物學(xué)和免疫治療。近的研究通過(guò)使用各種表型標(biāo)記拓寬了我們對(duì)人類 NK 細(xì)胞群的復(fù)雜性和異質(zhì)性的理解。在這里，我們概述了用于識(shí)別各種子集的常見(jiàn) NK 細(xì)胞蛋白質(zhì)標(biāo)記。
對(duì)于科學(xué)家來(lái)說(shuō)，定義 NK 細(xì)胞譜系并不是一項(xiàng)簡(jiǎn)單的任務(wù)，部分原因是沒(méi)有僅針對(duì) NK 細(xì)胞的已知標(biāo)記。它們傳統(tǒng)上被定義為產(chǎn)生 IFNG 的細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞，它既不是 T 細(xì)胞也不是 B 細(xì)胞。因此，在流式細(xì)胞術(shù)中通常通過(guò)首先排除其他淋巴細(xì)胞標(biāo)志物（如 CD3 T 細(xì)胞標(biāo)志物）來(lái)識(shí)別 NK 細(xì)胞。分選后，兩種標(biāo)記物已成為標(biāo)準(zhǔn) NK 細(xì)胞標(biāo)記物，CD56（神經(jīng)細(xì)胞粘附分子-1，NCAM1）和 CD16（低親和力 Fc γ 受體 3A、FCGR3A、FcγRIII）。這兩種表面蛋白的差異表達(dá)定義了常規(guī) NK 細(xì)胞的兩個(gè)主要亞群，CD56亮CD16 lo/- 和 CD56暗CD16 +，經(jīng)常簡(jiǎn)化為CD56明亮更多的 NK 細(xì)胞亞群可以用下面列出的其他標(biāo)記進(jìn)一步描述。 和 CD56 dim，分別。間外周血循環(huán)細(xì)胞， CD56明亮的 是較不豐富的，估計(jì)僅包括 5 - 10％的人口。 CD56 dim 代表超過(guò) 90% 的 NK 細(xì)胞。然而， CD56亮 已經(jīng)注意到在某些組織中，包括次級(jí)淋巴組織豐富。
NK細(xì)胞發(fā)育的標(biāo)志物
NK 細(xì)胞從骨髓中的常見(jiàn)淋巴祖細(xì)胞 (CLP) 發(fā)育而來(lái)。在這里，它們經(jīng)歷了不同的發(fā)育階段，包括 NK 細(xì)胞前體，以及未成熟和成熟的 NK 細(xì)胞。近的研究結(jié)果表明，發(fā)育也可以發(fā)生在次級(jí)淋巴組織中，例如淋巴結(jié)和脾臟。在此期間，細(xì)胞在 MHC-I 識(shí)別方面受到教育，以避免靶向健康的正常細(xì)胞。
早的 NK 細(xì)胞發(fā)育標(biāo)志物之一是 IL2RB (CD122)，它在 CD34+ CLP 進(jìn)入 NK 細(xì)胞命運(yùn)時(shí)表達(dá)。NK 細(xì)胞前體的亞群可以通過(guò) CD34、KIT、KLRB1、CD244 和 IL-15R 等基因的差異表達(dá)來(lái)識(shí)別。對(duì)于未成熟的 NK 細(xì)胞，已經(jīng)報(bào)道了 KLRK1、NCR1、NCR2、NCR3 和 KLRB1 的表達(dá)。到達(dá)光譜成熟末端的 NK 細(xì)胞可以通過(guò)它們的 KLRD1、ITGB2、KIR 受體、PRF1、IFNG、CD56 和 CD16 的表達(dá)來(lái)區(qū)分。
來(lái)自不同供應(yīng)商的標(biāo)記抗體搜索
CD56亮 子集被認(rèn)為是 NK 細(xì)胞成熟的早期階段。該子集具有更高的增殖能力，并與許多關(guān)鍵蛋白的顯著表達(dá)相關(guān)，包括 CCR7、CSF2、CXCR3、IL2RB、KLRC1 和 SELL。據(jù)報(bào)道，它還表達(dá)更高水平的 IFNG。CD56 的下調(diào)產(chǎn)生 CD56暗淡 NK 細(xì)胞亞群，與 CD16 的表達(dá)一致。該子集以其細(xì)胞毒活性而聞名，并且與殺傷性 Ig 樣受體 (KIR) 的表達(dá)有關(guān)，KIR 是一個(gè)跨膜糖蛋白家族，包含多個(gè)基因。與該子集相關(guān)的其他基因包括 CX3CR1、CXCR1、ITGB2、KLGR1 和 PRF1。
組織駐留NK細(xì)胞標(biāo)志物
與血液中循環(huán)的常規(guī) NK (cNK) 細(xì)胞相比，組織駐留 NK 細(xì)胞 (trNK) 存在于許多組織中，包括淋巴結(jié)、胸腺、肝臟、肺、子宮和小腸。一般而言，據(jù)報(bào)道，trNK 細(xì)胞的細(xì)胞毒性較低，同時(shí)保留了產(chǎn)生細(xì)胞因子的能力。盡管與傳統(tǒng)組相比，對(duì)它們的具體功能了解較少，但 trNK 可以發(fā)揮不同的作用，因?yàn)檠芯堪l(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子和 KIR 的表達(dá)譜不同。
近的研究表明，trNK 細(xì)胞包含具有不同免疫表型特征的特化、異質(zhì)群體。例如，淋巴結(jié)和扁桃體中的人類 trNK 細(xì)胞顯示 ICAM1 的高表達(dá)。在子宮中，trNK 細(xì)胞富含 KIR，并表達(dá) NCR2 和 NCR3 的不同剪接變體。已發(fā)現(xiàn)肺 trNK 細(xì)胞表達(dá)不同水平的 ITGA1、CD69 和 CD16。胸腺 trNK 細(xì)胞與 CD56 和 IL7R 的表達(dá)有關(guān)。肝 trNK 細(xì)胞顯著表達(dá) KLRC1 和 NCR1。在整個(gè)組織中，轉(zhuǎn)錄因子的譜也各不相同，例如 EOMES 和 TBX21。我們對(duì) NK 細(xì)胞在各種組織中的作用的了解仍處于早期階段，新發(fā)現(xiàn)無(wú)疑將鞏固更多表征 trNK 亞群和功能的關(guān)鍵標(biāo)志物。
適應(yīng)性NK細(xì)胞標(biāo)志物
一個(gè)不太常見(jiàn)的亞群，稱為適應(yīng)性 NK 細(xì)胞，已被建議發(fā)展免疫記憶，成為特化的記憶樣細(xì)胞。對(duì)巨細(xì)胞病毒感染的小鼠和人類 NK 細(xì)胞的研究揭示了與常規(guī) NK 細(xì)胞在功能和表型特征方面的一些顯著差異。在小鼠中，在一個(gè)長(zhǎng)壽 NK 細(xì)胞池中發(fā)現(xiàn)了標(biāo)記物 Ly49H，這些細(xì)胞可以在病毒再次暴露后迅速增殖并增加細(xì)胞因子的產(chǎn)生。在人類中，已發(fā)現(xiàn)先前接觸過(guò)病毒的適應(yīng)性 NK 細(xì)胞表達(dá)激活的 MHC I 類結(jié)合受體 KLRC2。據(jù)報(bào)道，差異表達(dá)的蛋白質(zhì)包括 NCR1、B3GAT1、KLRC2 和 LILRB1。
NK細(xì)胞標(biāo)記表
下表列出了表征各種 NK 細(xì)胞亞群的人和小鼠蛋白質(zhì)，如近的評(píng)論文獻(xiàn)所述。列出的大多數(shù)蛋白質(zhì)是在細(xì)胞表面表達(dá)的膜標(biāo)記物，但也包括其他定義蛋白質(zhì)，包括轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)蛋白，如細(xì)胞因子。伴隨每個(gè)標(biāo)記物的是相關(guān)抗體和 ELISA 試劑盒的鏈接，因?yàn)檫@些免疫檢測(cè)工具通常用于通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)和免疫染色進(jìn)行細(xì)胞表征研究。相關(guān)產(chǎn)品由各種商提供，可作為 NK 細(xì)胞免疫表型分析的有用參考。
基因 同義詞 標(biāo)記類型 蛋白質(zhì)類型 本土化 大小 (kDa) 參考 抗體 ELISA 試劑盒
B3GAT1 CD57 昏暗，發(fā)展，適應(yīng)性 受體 細(xì)胞膜 38.3 1、2、3、4、6、8 CD57抗體 CD57 ELISA
CCR7 CD197 明亮，trNK 受體 細(xì)胞膜 42.8 1、2、3、4、7、8 CCR7抗體 CCR7 ELISA
CD16 FcγRIII、FCGR3A pan-NK，暗淡 受體 細(xì)胞膜 29 1、2、3、4、5、6、7、8 CD16抗體 CD16 ELISA
CD2 LFA-2 一般 受體 細(xì)胞膜 39.4 1,2,3 CD2抗體 CD2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
CD226 DNAM-1 一般 受體 細(xì)胞膜 38.6 2,3,4,7 CD226抗體 CD226 ELISA
CD244 2B4, SLAMF4 發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 41.6 2,3,4,5 CD244 抗體 CD244 ELISA
CD27 發(fā)展, 老鼠 受體 細(xì)胞膜 2,5,7,8 CD27抗體 CD27 ELISA
CD3* T細(xì)胞 受體 細(xì)胞膜 1、4、5、6、8 CD3抗體 CD3酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
CD300A IRp60 一般 受體 細(xì)胞膜 33.2 2,3 CD300A 抗體 CD300A ELISA
CD34 發(fā)展 粘附分子 細(xì)胞膜 40.7 1、2、3、4、5 CD34 抗體 CD34 ELISA
CD58 LFA-3 一般 受體 細(xì)胞膜 28.1 1,2 CD58抗體 CD58 ELISA
CD59 一般 受體 細(xì)胞膜 14.2 1,3 CD59抗體 CD59 ELISA
CD69 核糖體 受體 細(xì)胞膜 22.6 4、5、6、7 CD69抗體 CD69 ELISA
腦脊液2 轉(zhuǎn)基因腦脊液 光明，發(fā)展 細(xì)胞因子 分泌的 16.3 1,5,6,7 CSF2抗體 CSF2 ELISA
CX3CR1 CX3CR2 昏暗，發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 40.4 1,2,4,6,8 CX3CR1 抗體 CX3CR1 ELISA
CXCR1 CD128 暗淡 受體 細(xì)胞膜 39.8 1、2、3、4、8 CXCR1 抗體 CXCR1 ELISA
CXCR3 CD183 明亮的 受體 細(xì)胞膜 40.7 1,4,8 CXCR3 抗體 CXCR3 ELISA
CXCR4 一般 受體 細(xì)胞膜 39.7 4,8 CXCR4 抗體 CXCR4 ELISA
歐米茄 TBR2 一般，trNK 轉(zhuǎn)錄因子 核 72.7 3、4、5、6、8 EOMES抗體 EOMES ELISA
廣州地鐵 一般 蛋白酶 分泌的 27.7 4,5,6,7,8 GZMB 抗體 GZMB ELISA
ICAM1 CD54 核糖體 受體 細(xì)胞膜 57.8 1,4 ICAM1抗體 ICAM1 ELISA
干擾素 干擾素γ 明亮的 細(xì)胞因子 分泌的 19.3 1、2、3、4、5、6、7 干擾素抗體 干擾素酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
IL-15R* 一般，發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 1、3、4、5、7、8 IL15RA 抗體 IL15RA ELISA
IL1R1 IL-1R 發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 65.4 1,4 IL1R1 抗體 IL1R1 ELISA
IL22 發(fā)展 細(xì)胞因子 分泌的 20 2,5,7 IL22 抗體 IL22 ELISA
IL2RB CD122 光明，發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 61.1 1、2、3、4、5 CD122抗體 CD122 ELISA
IL7R CD127、IL7RA 明亮，trNK，發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 51.6 2,4,5,6,7,8 IL7R 抗體 IL7R ELISA
ITGA1 CD49a 核糖體 受體 細(xì)胞膜 130.8 6,7 ITGA1抗體 ITGA1 ELISA
伊加2 CD49b 發(fā)展, 老鼠 受體 細(xì)胞膜 5,6,7 Itga2抗體 Itga2 ELISA
意大利加爾 CD11A、LFA-1 一般 受體 細(xì)胞膜 91.4 1,2 CD11a 抗體 CD11a ELISA
ITGAM CD11b 發(fā)展, 老鼠 受體 細(xì)胞膜 127.5 5,7,8 ITGAM抗體 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
ITGB2 CD18、LFA-1 暗淡 受體 細(xì)胞膜 84.8 1,2 ITGB2抗體 ITGB2 ELISA
基爾* 昏暗，trNK 受體 細(xì)胞膜 1、2、3、4、5、6、7、8 KIR抗體 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
KIR2DL1 p58.1 一般 受體 細(xì)胞膜 38.5 2,3 KIR2DL1 抗體 KIR2DL1 ELISA
KIR2DL2 p58.2 一般 受體 細(xì)胞膜 38.5 2,3 KIR2DL2 抗體 KIR2DL2 ELISA
成套工具 CD117 光明，發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 109.8 1,2,4,7 試劑盒抗體 試劑盒ELISA
Klrb1c NK1.1 一般, 鼠標(biāo) 受體 細(xì)胞膜 5,6 Klrb1c 抗體 Klrb1c ELISA
KLRC1 NKG2A 光明，發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 26.3 1、2、3、4、5、6、8 NKG2A 抗體 NKG2A ELISA
KLRC2 NKG2C 昏暗，自適應(yīng) 受體 細(xì)胞膜 26.1 2,3,4,5,8 NKG2C 抗體 NKG2C ELISA
KLRD1 CD94 光明，發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 20.5 1、2、3、4、7 CD94抗體 CD94 ELISA
KLRF1 NKp80 發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 26.6 2,3,4,5 KLRF1 抗體 KLRF1 ELISA
KLRG1 昏暗，發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 21.8 4,5 KLRG1 抗體 KLRG1 ELISA
KLRK1 NKG2D 發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 25.3 1、2、3、4、5、7 NKG2D 抗體 NKG2D ELISA
LILRB1 CD85J、ILT2 一般，自適應(yīng) 受體 細(xì)胞膜 70.8 1、2、3、4 LILRB1 抗體 LILRB1 ELISA
克拉4 Ly49D 一般, 鼠標(biāo) 受體 細(xì)胞膜 5,7 Klra4抗體 Klra4 ELISA
克拉8 Ly49H 自適應(yīng), 鼠標(biāo) 受體 細(xì)胞膜 4,5,6 Klra8 抗體 Klra8 ELISA
NCAM1 CD56 泛NK 受體 細(xì)胞膜 94.6 1、2、3、4、5、6、7、8 CD56抗體 CD56 ELISA
NCR1 NKp46、CD335 明亮，trNK，發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 34.5 2,3,4,5,6,7 NCR1抗體 NCR1 ELISA
NCR2 NKp44 trNK, 發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 30.7 2,3,5,7 NKp44 抗體 NKp44 ELISA
NCR3 NKp30、CD337 trNK, 發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 21.6 2,3,4,5,6,7 CD337抗體 CD337 ELISA
PRF1 穿孔素 暗淡 結(jié)合蛋白 分泌的 61.4 1、2、4、5、6、8 PRF1抗體 PRF1 ELISA
賣 CD62L，L-選擇素 明亮，trNK 受體 細(xì)胞膜 42.2 1、2、3、4、7、8 CD62L 抗體 CD62L ELISA
SIGLEC7 CD328 一般 受體 細(xì)胞膜 51.1 2,3 CD328 抗體 CD328 ELISA
SLAMF6 NTB-A 一般 受體 細(xì)胞膜 37.3 2,3,4 SLAMF6 抗體 SLAMF6 ELISA
SPN CD43 發(fā)展 受體 細(xì)胞膜 40.3 1,5 SPN抗體 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
TBX21 T-BET 一般，trNK 轉(zhuǎn)錄因子 核 58.3 3、4、5、8 TBX21 抗體 TBX21 ELISA
腫瘤壞死因子 TNF-α、TNFα 一般 細(xì)胞因子 細(xì)胞膜，分泌的 25.6 1、2、4、6、7 腫瘤壞死因子α抗體 腫瘤壞死因子αELISA
注意：有些蛋白質(zhì)是由幾個(gè)不同基因組成的蛋白質(zhì)同種型或多亞基蛋白質(zhì)復(fù)合物。從 UniProt.org 獲得的關(guān)于蛋白質(zhì)類型、定位和大小 (kDa) 的信息（僅適用于人類基因）。
NK 細(xì)胞 是一類 具有 先天 毒性 和免疫調(diào)節(jié) 能力 的* 淋巴細(xì)胞 群。 它們 占人體 循環(huán) 淋巴細(xì)胞 的5-20 %，而且 還存在 于多種 外周 組織 中。 NK 細(xì)胞 通過(guò) 自主 的靶向 性目標(biāo) 、感染 或癌細(xì)胞 ，釋放 引起 細(xì)胞分裂 的細(xì)胞毒 顆粒 ，從而 直接 促進(jìn) 免疫 。 NK 細(xì)胞 也通過(guò) 產(chǎn)生 炎癥因子(如干擾素 γ(IFNG)和腫瘤 壞死 因子 α(TNF ))間接 影響 免疫反應(yīng)。 NK 細(xì)胞 在免疫過(guò)程中扮演著 核心 而多樣 的角色 ，這也證明 了NK 細(xì)胞 在腫瘤 生物學(xué) 和免疫治療 等諸多 研究領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用 。 近來(lái) 的研究 擴(kuò)大 了我們 對(duì)NK 細(xì)胞 群復(fù)雜性 和異質(zhì)性 的認(rèn)識(shí) ，利用 各種 表型 標(biāo)記 。 本文 介紹 了常見(jiàn) 的NK 細(xì)胞 蛋白 標(biāo)記 ，用于 識(shí)別 不同 子集 。 對(duì)科學(xué)家 而言 ，定義 NK 細(xì)胞 譜系 并非 一個(gè) 簡(jiǎn)單 的任務(wù) ，部分 原因 是因?yàn)?沒(méi)有 已知 的NK 細(xì)胞 標(biāo)記 。 他們 通常 被定義 為細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞 ，能產(chǎn)生 IFNG，而非 T或B細(xì)胞 。 所以 ，流式細(xì)胞術(shù)通常 通過(guò) 先排除 其他 淋巴細(xì)胞 標(biāo)記 物(例如 CD3T細(xì)胞 標(biāo)記 )來(lái)識(shí)別 NK 細(xì)胞 。 經(jīng)分離 ，兩種 標(biāo)記 物均成為 NK 細(xì)胞 的標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)記 物，CD56(神經(jīng)細(xì)胞 粘附分子 1,NCAM1)和CD16(低親和 Fc γ3A,FCGR3A,Fc γRIII)。 在正常 NK 細(xì)胞 中，CD56亮CD16lo/-和CD56暗CD16+，常簡(jiǎn)化 為CD56，更多 的NK 細(xì)胞 亞群 可用 下面 列出 的其他 標(biāo)記 進(jìn)一步 描述 。 與CD56dim分別 。 CD56呈亮的間外周血 循環(huán) 細(xì)胞 ，估計(jì) 只包含 5-10 %的人口 。 CD56dim代表 90 %以上 的NK 細(xì)胞 。 但是 ，CD56光在一些 組織 中已發(fā)現(xiàn) 豐富 ，包括 次級(jí) 淋巴組織。 NK 細(xì)胞 發(fā)育 的標(biāo)志 。
NK 細(xì)胞 是由骨髓 中常見(jiàn) 的淋巴 祖細(xì)胞 (CLP )發(fā)育 而成。 這些 細(xì)胞 經(jīng)歷了不同 的發(fā)育階段 ，包括 NK 細(xì)胞 前體細(xì)胞 和未成熟 NK 細(xì)胞 。 近來(lái) 的研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)展 也可能 發(fā)生 在次級(jí) 淋巴組織，如淋巴結(jié) 和脾臟 。 這一時(shí)期 ，MHC -I的識(shí)別 教育 細(xì)胞 避免 了針對(duì) 正常 細(xì)胞 的目標(biāo) 。 IL2RB(CD122)(CD34 +CLP 進(jìn)入 NK 細(xì)胞 命運(yùn) )是NK 細(xì)胞 早期 的標(biāo)記 物。
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